紫外分析儀有三用紫外分析儀、暗箱式紫外分析儀、可照相紫外分析儀等系列,不同的紫外分析儀有不同的用途。紫外分析儀采用不同波長(cháng)引進(jìn)電泳分析、檢測,PCR產(chǎn)物檢測,DNA指紋圖譜分析,紙層分析或薄層分析等。
紫外分析儀是熒光技術(shù)的應用,熒光技術(shù)是什么呢?首先了解一下什么是熒光,熒光又作"螢光",是指一種光致發(fā)光的冷發(fā)光現象。當某種常溫物質(zhì)經(jīng)某種波長(cháng)的入射光(通常是紫外線(xiàn)或X射線(xiàn))照射,吸收光能后進(jìn)入激發(fā)態(tài),并且立即退激發(fā)并發(fā)出比入射光的的波長(cháng)長(cháng)的出射光(通常波長(cháng)在可見(jiàn)光波段);而且一旦停止入射光,發(fā)光現象也隨之立即消失。具有這種性質(zhì)的出射光就被稱(chēng)之為熒光。知道了什么是熒光,顧名思義就能想到什么是熒光技術(shù)。熒光技術(shù)是某些物質(zhì)受一定波長(cháng)的光激發(fā)后,在較短時(shí)間內(10-8秒)會(huì )發(fā)射出波長(cháng)大于激發(fā)波長(cháng)的光,這種光稱(chēng)為熒光。這一發(fā)光現象在各方面的應用及有關(guān)的方法稱(chēng)為熒光技術(shù)。
熒光技術(shù)在生物化學(xué)及分子生物學(xué)研究中應用主要包括以下幾個(gè)方面:
1、物質(zhì)的定性:不同的熒光物質(zhì)有不同的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜,因此可用熒光進(jìn)行物質(zhì)的鑒別。與吸收光譜法相比,熒光法具有更高的選擇性。
2、定量測定:利用在較低濃度下熒光強度與樣品濃度成正比這一關(guān)系可以定量分析樣品中熒光組分的含量,常用于測定氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸的含量。熒光定量測定的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高,例如維生素B2的測定可達1毫微克/毫升,這一優(yōu)點(diǎn)使測定時(shí)所需要樣品量大大減少。這種定量測定方法還可應用于酶催化的反應,只要反應前后有熒光強度的變化,就可用來(lái)測定酶的含量及酶反應的速率等。
3、研究生物大分子的物理化學(xué)特性及其分子的結構和構象:熒光的激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率和熒光壽命等參數不僅和分子內熒光發(fā)色基團的本身結構有關(guān),而且還強烈地依賴(lài)于發(fā)色團周?chē)沫h(huán)境,即對周?chē)h(huán)境十分敏感。利用此特點(diǎn)可通過(guò)測定上述有關(guān)熒光參數的變化來(lái)研究熒光發(fā)色團所在部位的微環(huán)境的特征及其變化。在此研究中,除了利用生物大分子本身具有的熒光發(fā)色團(如色氨酸、酪氨酸、鳥(niǎo)苷酸等,此類(lèi)熒光稱(chēng)為內源熒光)以外,可將一些特殊的熒光染料分子共價(jià)地結合或吸附在生物大分子的某一部位,通過(guò)測定該染料分子的熒光特性變化來(lái)研究生物大分子,這種染料分子被稱(chēng)為"熒光探針",它們發(fā)出的熒光一般稱(chēng)為外源熒光。熒光探針的應用,大大地開(kāi)拓了熒光技術(shù)在分子生物學(xué)中的應用范圍。
4、利用熒光壽命、量子產(chǎn)率等參數可以研究生物大分子中的能量轉移現象:通過(guò)該現象的研究,可以獲得生物大分子內部的許多信息。